外泌体冷链运输及保存完整指南：从样本采集到实验应用162

外泌体，作为细胞分泌的微小囊泡，承载着丰富的蛋白质、核酸和脂质等生物活性分子，在细胞间通讯、疾病诊断和治疗等领域展现出巨大的潜力。然而，外泌体的提取、保存和运输对温度和操作条件都极其敏感，稍有不慎就会导致其降解或功能丧失，影响后续实验结果的准确性。因此，掌握规范的外泌体冷链操作技术至关重要。本文将详细阐述外泌体冷链操作的各个环节，为科研人员提供全面的指导。

一、样本采集与预处理

外泌体样本的采集方式取决于来源，包括血液、尿液、唾液、细胞培养上清液等。无论何种样本类型，都应遵循以下原则：无菌操作、快速处理、避免反复冻融。具体操作如下：

1. 血液样本：采集血液后，应立即加入抗凝剂（如EDTA、肝素），避免血液凝固。轻轻颠倒混匀后，在4℃条件下尽快进行离心，去除血细胞等大颗粒杂质。建议在采集后2小时内完成预处理，并转移至-80℃保存或立即进行外泌体提取。

2. 尿液样本：收集尿液样本后，应立即离心去除细胞碎片和其他大颗粒杂质。建议在4℃条件下保存，并尽快进行外泌体提取或转移至-80℃保存。

3. 唾液样本：收集唾液样本后，应立即离心去除细胞碎片和沉淀物。建议在4℃条件下保存，并尽快进行外泌体提取或转移至-80℃保存。

4. 细胞培养上清液：收集细胞培养上清液后，应立即进行离心去除细胞碎片和杂质。建议在4℃条件下保存，并尽快进行外泌体提取或转移至-80℃保存。

所有样本采集和预处理过程都应在无菌环境下进行，以避免污染。

二、外泌体提取与纯化

外泌体提取方法众多，包括超速离心法、超滤法、免疫亲和法、沉淀法等。选择合适的方法取决于样本类型、实验目的和后续实验需求。提取完成后，应立即进行下一步操作或保存。

三、外泌体冷链保存

外泌体样本的保存温度直接影响其稳定性和功能。通常情况下，短期保存（

2025-06-15

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