外泌体冷链运输及存储：完整操作指南74

外泌体，作为细胞分泌的纳米级囊泡，在疾病诊断、治疗以及生物医学研究中扮演着越来越重要的角色。然而，外泌体提取后极易降解，对其进行正确的冷链操作至关重要，才能保证其生物活性及研究结果的可靠性。本文将详细介绍外泌体冷链操作的全流程，包括样本采集、处理、运输和储存等各个环节，旨在帮助研究人员更好地维护外泌体的完整性。

一、 样本采集与预处理

外泌体样本的采集和预处理是保证其质量的关键第一步。不同类型的样本（如血清、血浆、尿液、细胞培养上清液等）需要采用不同的采集方法。例如，采集血液样本时，应避免剧烈震荡，并使用无热源、无内毒素的采血管。建议使用含有抗凝剂的采血管，例如EDTA或肝素抗凝管，但需注意不同抗凝剂对后续外泌体分离纯化方法的影响。采集完成后，应立即进行预处理，以最大限度地减少外泌体降解。

预处理步骤通常包括：离心去除细胞碎片和血细胞，降低样本黏度，避免影响后续外泌体分离纯化效率。对于血浆或血清样本，建议在4℃条件下，依次进行300g离心10分钟和2000g离心10分钟，以去除血细胞和细胞碎片。对于细胞培养上清液，则需要根据细胞类型和培养条件进行适当调整，通常需要过滤去除细胞碎片。预处理后的样本应尽快进行下一步处理或冷冻保存。

二、 外泌体分离纯化后的处理

外泌体分离纯化后，其浓度通常较低，且容易受环境因素影响而降解。因此，需要立即采取相应的冷链措施。分离纯化后的外泌体样本通常需要进行浓缩和缓冲液更换，以去除残留的试剂和杂质，提高外泌体浓度。浓缩后的外泌体溶液应立即置于4℃保存，并尽快进行后续实验或冷冻保存。

三、 冷冻保存

长期保存外泌体样本通常采用超低温冷冻保存（-80℃或液氮）。在冷冻之前，建议加入合适的冷冻保护剂，例如甘油或DMSO，以降低冷冻过程中冰晶的形成，减少对外泌体结构和功能的损伤。冷冻保护剂的浓度需要根据具体实验条件进行优化，避免过高浓度对后续实验产生干扰。冷冻过程应缓慢进行，例如采用程序降温仪，以尽量减少冰晶的形成。解冻时也应缓慢解冻，避免温度骤变，建议在4℃进行缓慢解冻。

四、 冷链运输

外泌体样本的运输需要确保在整个过程中维持低温，避免温度波动。运输方式的选择取决于运输距离和时间。短距离运输可采用冰袋或冰盒，维持4℃温度；长距离运输则需要使用干冰或液氮，维持-80℃或更低温度。运输过程中，应使用合适的保温容器，并做好标记，注明样本类型、采集时间、保存温度等信息。建议使用专业的冷链运输服务，确保样本安全到达目的地。

五、 冷链操作注意事项

在整个外泌体冷链操作过程中，需要特别注意以下几点：
避免反复冻融：反复冻融会严重损伤外泌体，使其生物活性降低甚至丧失。应尽量一次性取出所需体积，避免多次冻融。
选择合适的容器：使用无菌、无内毒素的离心管或冻存管，避免样本污染。
做好记录：详细记录样本采集、处理、运输和储存的各个环节，包括时间、温度、操作步骤等，以便追溯和分析。
规范操作：严格按照操作规程进行操作，避免人为失误。
定期检查：定期检查冷藏设备和冷冻设备的温度，确保其运行正常。

总结而言，外泌体冷链操作是保证外泌体质量的关键。只有严格遵守规范的操作流程，才能最大限度地保留外泌体的生物活性，确保研究结果的可靠性和准确性。希望本文能够为研究人员提供有益的参考，推动外泌体研究的进一步发展。

2025-06-15

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